Nueva prueba para COVID-19 ofrece resultados más rápidos

La pandemia de COVID-19 ha provocado más de 2.5 millones de casos confirmados en todo el mundo y casi más de 170,000 muertes al 21 de abril, según la Organización Mundial de la Salud. La identificación temprana de pacientes potenciales y el diagnóstico seguido de aislamiento son críticos para controlar la pandemia actual y aplanar la curva. Este estudio describe un método novedoso que puede permitir que las instalaciones descentralizadas brinden servicios de prueba más rápidos para COVID-19 a más personas, informa el Journal of Molecular Diagnostics, publicado por Elsevier.

Las pruebas de diagnóstico para el SARS-CoV-2, el patógeno viral causante de COVID-19, son críticas para detectar el virus, comprender su epidemiología, informar el manejo de casos y suprimir la transmisión. El diagnóstico actualmente se basa principalmente en métodos que involucran RT-qPCR (PCR cuantitativa de transcripción inversa), pero su capacidad está limitada por la disponibilidad de instalaciones e instrumentos de alto nivel.

El investigador principal Jin-Soo Maeng, PhD, Centro de Investigación Convergente de Infección por Virus Emergentes, Instituto de Investigación de Tecnología Química de Corea, Daejeon, y Grupo de Investigación de Procesamiento de Alimentos, Instituto de Investigación de Alimentos de Corea, Wanju-gun, República de Corea, y sus colegas desarrollaron y evaluó ensayos de RT-LAMP (amplificación isotérmica mediada por bucle de transcripción inversa) para detectar ARN genómico (ácido ribonucleico) de SARS-CoV-2. RT-LAMP es un método de amplificación de ácido nucleico de un solo paso que se utiliza en el diagnóstico de enfermedades infecciosas causadas por bacterias o virus.

Los investigadores primero diseñaron conjuntos de cebadores LAMP dirigidos a regiones genómicas específicas del SARS-CoV-2 en comparación con otros coronavirus patógenos humanos. A través de la detección posterior de sensibilidad y tiempo de reacción, encontraron dos conjuntos de cebadores LAMP prometedores. Luego optimizaron las reacciones de RT-LAMP para cada uno de los dos conjuntos y evaluaron el límite de detección y la especificidad para otros coronavirus.

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Los ensayos de RT-LAMP en este estudio pudieron detectar tan solo 100 copias de ARN de SARS-CoV-2. No se observó reactividad cruzada de los ensayos de RT-LAMP a otros coronavirus humanos. Los conjuntos de cebadores se usaron como punto de partida y se combinaron con la detección colorimétrica de cristal violeta, que puede aumentar el rendimiento de la prueba. La reacción se puede realizar e interpretar con un instrumento muy simple, como un horno de secado o un baño de agua. El rendimiento de los ensayos puede modificarse aún más mediante la adopción de otros métodos de detección y el uso de otros sistemas enzimáticos.

"Las pruebas de amplificación de ácido nucleico isotérmico como RT-LAMP tienen el potencial de usarse en el punto de atención con una sensibilidad comparable a la de las pruebas actuales de RT-qPCR", señaló el Dr. Maeng. "Aunque todavía se requiere la extracción adecuada de la muestra de ARN, nuestro método RT-LAMP tiene el potencial de ejecutarse en instalaciones de prueba descentralizadas para proporcionar servicios de prueba más rápidos a más personas".

"Aunque RT-qPCR es el estándar de oro para la detección de patógenos debido a su alta sensibilidad y especificidad, todavía hay algunas advertencias", explicó el Dr. Maeng. "Los laboratorios de pruebas centralizados, con instalaciones como un suministro confiable de electricidad, instrumentos costosos y personal capacitado, deben realizar las pruebas RT-qPCR de manera adecuada. Idealmente, las pruebas de detección deben ser no solo sensibles, sino también simples y rápidas para que pueden realizarse en el punto de atención. El objetivo principal de nuestra investigación fue identificar un método con alto potencial de diagnóstico que pueda operar en instalaciones descentralizadas ".

RT-qPCR mide la cantidad de un ARN específico, una molécula polimérica esencial en diversas funciones biológicas en la codificación, decodificación, regulación y expresión de genes. Otros ensayos moleculares que detectan el patógeno también están en desarrollo.